摘要 為了解豬弓形蟲(chóng)的感染情況,隨機(jī)采集新鄉(xiāng)市某屠宰場(chǎng)的待宰豬血液50份,通過(guò)弓形蟲(chóng)間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)其抗體水平。結(jié)果表明,弓形蟲(chóng)抗體效價(jià)在1∶64以上的有7頭,陽(yáng)性率為14%,可為弓形蟲(chóng)病的防治提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 待宰豬;弓形蟲(chóng);正向間接血凝試驗(yàn);血清學(xué)調(diào)查

中圖分類號(hào) S858.28;R531.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739(2010)18-0294-01

弓形蟲(chóng)病是由剛地弓形蟲(chóng)寄生在人、畜、禽的肺、淋巴結(jié)、肝、脾、腦及其他組織細(xì)胞內(nèi)引起的一種急性、熱性原蟲(chóng)病,是一種人和多種動(dòng)物共患的寄生蟲(chóng)病[1]。人或動(dòng)物通過(guò)攝入被剛地弓形蟲(chóng)卵囊污染的食物或水源,或通過(guò)攝食含包囊的肉而被感染。在美國(guó),豬肉是被認(rèn)為引起人感染弓形蟲(chóng)病的主要傳染源[2]。弓形蟲(chóng)病對(duì)人類健康危害極大,可造成孕婦流產(chǎn)、死胎、畸形兒、弱智兒等一系列圍產(chǎn)期疾患,同時(shí)它也是神經(jīng)系統(tǒng)和眼科疾患的主要病原之一[1]。因此該病給人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來(lái)極大危害和威脅。為了解新鄉(xiāng)市待宰豬弓形蟲(chóng)的感染情況,通過(guò)弓形蟲(chóng)正向間接血凝試驗(yàn)(IHA),進(jìn)行弓形蟲(chóng)感染的血清學(xué)調(diào)查。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)材料

樣品來(lái)自新鄉(xiāng)市某屠宰場(chǎng)的待檢豬,隨機(jī)采集血液50份;弓形蟲(chóng)間接血凝抗原、陰性血清、陽(yáng)性血清及稀釋液,購(gòu)自中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所。試驗(yàn)器材:微量移液器,96孔“V”型微量反應(yīng)板,微型振蕩機(jī),生化培養(yǎng)箱,電熱恒溫水浴鍋。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1診斷抗原的預(yù)處理。按凍干抗原瓶簽所標(biāo)毫升數(shù)用滅菌蒸餾水稀釋搖勻,放入滅菌離心管中,1 500~2 000 r/min離心10 min,棄去上清液,加等量稀釋液搖勻,之后置于4 ℃冰箱中放置24 h,作為診斷液使用。稀釋后的診斷液要在10 d內(nèi)用完,否則棄用。

1.2.2血清分離。將血樣置于37 ℃生化培養(yǎng)箱中1 h,之后置4 ℃冰箱,自然析出血清,將血清抽出裝入小離心管中,于56 ℃水浴鍋中滅活30 min,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3加稀釋液。反應(yīng)在96孔“V”型微量反應(yīng)板上進(jìn)行,每塊血凝板設(shè)待檢血清、陽(yáng)性血清、陰性血清和稀釋液對(duì)照孔。用移液器加稀釋液于96孔“V”型微量反應(yīng)板上,每孔75μL。稀釋液于陽(yáng)性、陰性血清對(duì)照孔各加8孔,被檢血清孔各加4孔。

1.2.4稀釋。在第1孔加陽(yáng)性血清、陰性血清和待檢血清各25 μL,混勻,稀釋,用移液器移取25 μL置于相應(yīng)第2孔內(nèi),按此法依次往后稀釋,稀釋到第7孔或第3孔,最后棄去25 μL,每孔內(nèi)的液體量為75 μL。每排的最后一孔為稀釋液對(duì)照孔。

1.2.5加診斷液。每孔加25 μL診斷液,加完后將反應(yīng)板置于微型振蕩器上,振蕩1~2 min,直到診斷液中的血球分布均勻。取下反應(yīng)板,蓋上一張與反應(yīng)板大小相等的干凈紙,以防止灰塵落入。置于37 ℃下作用2~3 h,判定結(jié)果。

1.2.6結(jié)果判定。以50%紅細(xì)胞凝集(++)的最高稀釋倍數(shù)判定為該血清的凝集價(jià)(效價(jià))。在陽(yáng)性對(duì)照血清滴度不低于1:1024(第5孔“++”),陰性對(duì)照孔血清除第1孔允許存在前滯現(xiàn)象(+)外,其余各孔及稀釋液對(duì)照孔均為“-”的前提下,對(duì)待檢血清進(jìn)行判定。血清抗體效價(jià)≥1∶64者判為陽(yáng)性;效價(jià)≤1∶64者判為陰性。最后統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性率。

2結(jié)果與分析

由表1可以看出,在50份待宰豬被檢血清樣品中,弓形體抗體的陽(yáng)性數(shù)為7份,陽(yáng)性率為14%。此結(jié)果較1989年河南省人畜弓形蟲(chóng)病調(diào)查協(xié)作組[3]對(duì)武涉縣調(diào)查的豬弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率(49.41%)、1992年杜重波等[4]對(duì)發(fā)生豬流產(chǎn)的甘肅省高臺(tái)縣種豬場(chǎng)調(diào)查的弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率(41.5%)和1996年畢運(yùn)龍等[5]對(duì)云南省53個(gè)縣調(diào)查的豬弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率(26.4%)低;與1998年張德林等[6]對(duì)甘肅省天?？h調(diào)查的豬弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率(13.8%)、2006年王天奇等[7]對(duì)洛陽(yáng)地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)調(diào)查的弓形蟲(chóng)抗體總陽(yáng)性率(16.5%)和育肥豬的陽(yáng)性率(11.3%)接近。說(shuō)明豬弓形蟲(chóng)的感染率目前趨于平穩(wěn),豬群感染率與樣品采集的對(duì)象、時(shí)期、地區(qū),以及飼養(yǎng)管理狀況和豬健康狀況等因素有關(guān)。

3結(jié)論與討論

3.1豬場(chǎng)感染弓形蟲(chóng)的原因與對(duì)策

屠宰場(chǎng)的待宰豬來(lái)自新鄉(xiāng)市的養(yǎng)豬專業(yè)戶或散養(yǎng)戶,飼養(yǎng)方式為圈養(yǎng),飼喂配合飼料,這種飼養(yǎng)方式在一定程度上限制了豬弓形蟲(chóng)的感染和傳播。待宰豬的弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為14%,說(shuō)明新鄉(xiāng)市豬群依然存在弓形蟲(chóng)的感染,可能與目前豬場(chǎng)老鼠成災(zāi)、豬場(chǎng)養(yǎng)貓滅鼠和農(nóng)村流浪貓?jiān)龆嗟纫蛩赜嘘P(guān)。建議相關(guān)部門設(shè)立流浪貓收容所,對(duì)流浪貓進(jìn)行收容、去勢(shì)和領(lǐng)養(yǎng)等工作。豬場(chǎng)禁止養(yǎng)貓,加強(qiáng)飼料保管,嚴(yán)防被貓糞污染,同時(shí)做好滅鼠工作。新鄉(xiāng)市城郊有飼喂泔水的豬,主要銷往外地,所采樣品并沒(méi)有涉及。

3.2弓形蟲(chóng)感染檢測(cè)方法的選擇

用弓形蟲(chóng)正向間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)人或動(dòng)物弓形蟲(chóng)感染(下轉(zhuǎn)第296頁(yè))

(上接第294頁(yè))

的循環(huán)抗體,在感染后12 d左右即可檢出,并且循環(huán)抗體可在1~2年內(nèi)維持較高水平[4],IHA法具有簡(jiǎn)便、快捷、特異、對(duì)試驗(yàn)條件要求不高等特點(diǎn),適合弓形蟲(chóng)感染的流行病學(xué)調(diào)查。2007年王艷華等[8]研制的弓形蟲(chóng)抗體免疫膠體金快速檢測(cè)試紙條,其靈敏度明顯高于IHA法,適用于弓形蟲(chóng)病的早期檢測(cè)和診斷,具有巨大的臨床應(yīng)用前景。1992年杜重波等[4]研制的抗弓形蟲(chóng)單克隆抗體反向間接血凝診斷試劑(MCAb-RIHA)和1989年傅翠娥等[9]建立的ELISA雙單克隆抗體夾心法可檢測(cè)血清弓形蟲(chóng)循環(huán)抗原,具有診斷弓形蟲(chóng)急性或活動(dòng)性感染的價(jià)值,可以用于弓形蟲(chóng)病早期診斷、流產(chǎn)病因?qū)W調(diào)查和流行病學(xué)調(diào)查。

3.3避免弓形蟲(chóng)的職業(yè)感染

弓形蟲(chóng)的滋養(yǎng)體會(huì)通過(guò)口、鼻、咽、呼吸道粘膜、眼結(jié)膜和皮膚侵入各種動(dòng)物和人的體內(nèi)[10]。弓形蟲(chóng)病具有一定職業(yè)分布特點(diǎn),動(dòng)物飼養(yǎng)員、屠宰工人、肉類加工工人及弓形蟲(chóng)病實(shí)驗(yàn)室等人群易于感染[11]。獸醫(yī)、動(dòng)物飼養(yǎng)員、屠宰工人、肉類出售和加工人員在工作時(shí),應(yīng)戴防護(hù)性手套和口罩,以免感染,并定期測(cè)定弓形蟲(chóng)抗體水平。1%來(lái)蘇兒溶液1 min內(nèi)能殺死滋養(yǎng)體[10],可用其對(duì)污染的環(huán)境和器械進(jìn)行消毒。

4參考文獻(xiàn)

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